### 产品及特点

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具有以下显著特点：

• 即开即用，用户只需提供样本DNA模板。
• 优化后的引物及组分，提高了灵敏度。
• 提供阳性对照，便于识别假阴性样品。
• 引物设计遵循中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，确保高特异性，避免与其他生物样本DNA的交叉反应。
• 可进行定性与定量检测，定量检测时线性范围可达至少5个数量级。
• 本产品可满足50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
• 本产品仅限于科研用途。

### 方法流程

**一、DNA提取（样本制备区）** 使用自选方法提取并纯化样本DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

**二、稀释标准曲线样品（样本制备区）** 由于阳性对照浓度较高，请在独立区域内进行以下稀释操作，以避免污染样本或本试剂盒的其他成分：

1. 标记6个离心管，分别为7、6、5、4、3、2。
2. 用带芯枪头加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，放冰上待用。
4. 更换枪头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，放冰上待用。
5. 重复以上步骤，直至获得6个稀释度的标准曲线样品，放冰待用。如无需制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

**三、试剂配制（试剂准备区）** 如需检测N个样本，准备N+2个qPCR管，并按说明向各PCR管中添加相应成分（详见使用说明书）。

**四、添加模板（模板添加区）** 分别向qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板以及婴儿利什曼虫qPCR阳性对照。离心30秒后立即进行扩增反应。

**五、扩增反应（扩增及产物分析区）** 将PCR管放置于PCR扩增仪器的样品槽中，进行扩增，扩增程序详见使用说明书。

**六、结果分析** 1. 如果制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴绘制标准曲线。通过待测样品的Ct值从标准曲线上推算样品DNA浓度的log值，从而获取其浓度。 2. 若未制作标准曲线，根据以下标准判定结果： - 阳性对照：Ct值<30，有明显指数增长，曲线呈典型S型。 - 阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显的指数增长期与平台期。 - 样本检测结果：Ct值<35，显示样本中检测出婴儿利什曼虫，为阳性；Ct值38或无Ct值，则表明未检测出婴儿利什曼虫，为阴性；Ct值在35-38范围时，应进行复检。如重复实验结果仍在此范围且有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

### 运输及保存

本产品需低温运输，保存于-20℃，保存期限为一年。阳性对照需单独放置，以免污染其他试剂。选择尊龙凯时的产品，确保检测的可靠性与准确性。