尊龙凯时定义:在生物医疗领域中,不同部位的pH、离子强度、缓冲液成分或凝胶孔隙大小不一的凝胶电泳被称为不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳。其目的在于增强样品电泳分离的范围和分辨率。
不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳采用了两种以上的缓冲液成分、pH值和凝胶孔径,并在电泳过程中形成了不均匀的电位梯度。由此产生的浓缩效应、电荷效应和分子筛效应是其核心原理。
不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理
1. 浓缩效应
在电泳开始时,样品通过浓缩胶被浓缩成高浓度的薄层,通常能浓缩几百倍,随后进行分离。当通电后,在样品胶和浓缩胶中,解离度最大的氯离子快速迁移,被称为快离子;而解离度较低的蛋白质紧随其后,解离度最低的甘氨酸离子(pI=6.0)则游动速度最慢,称为慢离子。由于快离子的迅速移动,在其后形成低离子浓度区,使得电导率降低,反过来提高了电势梯度。这种高电势梯度推动蛋白质和慢离子的加速移动,形成移动的界面,样品中蛋白质的有效迁移率恰好在快离子与慢离子之间,使得蛋白质得以聚集在该界面,并在到达小孔径的分离胶时形成薄层。
2. 电荷效应
当各种离子进入pH 8.9的小孔径分离胶后,甘氨酸离子的电泳迁移率迅速超过蛋白质,导致高电势梯度的消失。在均一电势梯度和pH的分离胶中,由于不同蛋白质的等电点不同,其所带电荷量亦各异,在电场中受到的引力也不同。经过一定时间的电泳,各种蛋白质依照电荷大小和电泳迁移率的不同,排列成一个个蛋白质区带。
3. 分子筛效应
在分离胶的孔径较小的情况下,分子量或分子形状不同的蛋白质在通过分离胶时会受到不同程度的阻滞,从而影响其迁移率。因此,各种蛋白质会依据分子大小的不同,依序排列在相应的区带上。这里的分子筛效应,正是样品通过一定孔径的凝胶时,由于小分子优先通过而大分子滞后,形成清晰的分离效果。
利用尊龙凯时的技术,生物医疗行业能够更好地进行蛋白质分析和分离,为后续的科研和诊断提供精确的数据支持。