尊龙凯时人B细胞淋巴瘤OCILy19细胞培养说明书
一、细胞培养条件
细胞名称：人B细胞淋巴瘤OCILy19
生长特性：悬浮生长
冻存条件：使用无血清冻存液
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：第一次建议1:2传代，传代后每两天更换培养基。
备注：用无菌离心管收集培养基，可以用于过渡对比培养。如对比培养效果不理想，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。
二、细胞收到后处理
收到细胞后，培养至良好状态并灌满完全培养液，封好瓶口，是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，用75%酒精消毒整个细胞瓶，随后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，再进行下一步处理。显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（最好为40x、100x、200x各一张），前3天的照片非常重要，如未提供照片则默认为收到状态良好。传代后建议使用原瓶的完全培养基和自配的完全培养基进行对比培养，并在换液后将瓶盖拧松。
三、细胞培养步骤
a、细胞传代：
如未超过80%汇合度，将完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱培养；如细胞密度超过80%，可进行传代培养，具体步骤如下：
- 弃去培养上清液，用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
- 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，并在显微镜下观察细胞消化情况。若大部分细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲几下培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
- 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
- 将细胞悬液按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
b、细胞冻存：
- 细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
- 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
- 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
- 将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐，应在-80℃冰箱中存放至少24小时后再转入液氮罐。
c、细胞复苏：
- 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护具），快速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
- 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
- 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放在37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
- 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项
有些细胞在运输过程中可能会发生脱落，这是正常现象。若脱落细胞较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清液以进行过渡培养（后期可进行对比培养），沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打、重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清，补充1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
五、售后条款
1）关于细胞出现问题后可重发的情况及判定标准：
- 细胞在运输过程中出现问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏等，均可重发；
- 收到细胞48小时内若出现污染问题，请真实反馈实验结果，核实后可重发；
- 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰发货细胞复苏24小时后若绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发；
- 对于干冰发货的细胞复苏后24小时或常温发货细胞静置4小时且未开封时出现污染，也可重发；
- 细胞活性问题需在收到产品7天内提出真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发；
- 收到细胞当天及第2、3天请拍照，若3天后未告知，则视为产品合格。若4-7天内出现问题，须提供收到细胞前3天的照片、问题照片及操作详细步骤，技术人员将根据情况判断责任，如因我方原因重发；若双方责任，则需协商处理或按合同价的50%重发。
2）不予重发的情况：
- 如因客户造成的污染，不重发；
- 因客户不当操作导致细胞状态不佳，不重发；
- 使用非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳，不重发；
- 细胞状态不佳且未提供细胞培养前3天的照片，不重发；
- 其他处理导致细胞培养失败的不重发；
- 若在收到细胞2天内未反馈，不予以重发；
- 具体情况将根据判断而定。
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