SV40转染人成骨细胞HFOB119培养指导

一、细胞培养条件

细胞名称：SV40转染人成骨细胞HFOB119
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM/F12 + 0.3mg/ml G418 + 10% FBS
传代方法：首次建议1:2传代，隔2天更换培养液。
备注：使用无菌离心管收集培养基以进行对比培养。如对比培养效果不理想，建议直接购买<强>尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理流程

在细胞恢复良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口是最佳运输方式。收取细胞前，需用75%酒精喷洒整个细胞瓶以保证消毒。随后，将细胞瓶放入35℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后在显微镜下观察细胞生长情况，拍摄不同倍数的细胞图片（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是售后支持的重要依据，如果不提供照片则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如细胞未超过80%汇合度，将完全培养液收集至离心管中，留5ml培养基于培养箱中继续培养。如细胞密度超过80%，请按照下列步骤进行传代：

1. 弃去上清液，用不含钙镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于35℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞是否大部分变圆并脱落，及时用5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，用1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶（两个T25瓶），补充至5-8ml，放入35℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，PBS洗涤一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1ml，观察细胞回缩变圆后加5ml完全培养基终止消化，轻松吹打细胞并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀细胞后加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞置于-80℃冰箱。如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中保存24小时后再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，快速置入35℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%的酒精擦拭外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放于35℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会因贴壁不牢而发生脱落，这属于正常现象。如脱离较多，可以通过以下方法处理：将培养瓶的培养液收集至离心管，进行离心，收集上清以作过渡培养。加入胰酶轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟，再加5ml完全培养基终止反应，接着离心处理。重复加完全培养基重悬后，按1:2比例分瓶培养。

五、售后条款

1. 细胞问题重发条件：运输中遭遇损失、细胞污染，并在特定时间内反馈的真实结果，均可重发。
2. 不予重发情况：客户自身原因导致的细胞问题，如操作不当、使用不当培养体系或未及时反馈等情况，将不予重发。